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2101程序降温仪的细胞冻存操作步骤

发布日期: 2019-03-13
浏览人气: 547
   2101程序降温仪的细胞冻存操作步骤
  2101程序降温仪简单来说由程序来控制温度,慢慢的逐步减低保存温度,以免减温速度过快,冰晶刺破冻存样品(如细胞、胚胎,降温过快冰晶容易刺破其细胞壁),从而使得样品失效。也称为程控降温仪、胚胎冷冻仪等等。主要应用在精子、细胞、胚胎等领域的储存,以及骨髓、造血干细胞、皮肤、角膜、内分泌腺体、以及血管和瓣膜等的冷冻保存。
  2101程序降温仪进行细胞冷冻保存:
  1.材料
  生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管、0.4%(w/v)trypanblue、血球计数盘与盖玻片、2101程序降温仪。
  2.冷冻保存方法
  (1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟>-20℃30分钟>-80℃16-18小时(或隔夜)>液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  (2)程序降温:利用已设定程序的2101程序降温仪以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
  3.步骤
  (1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。
  (2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜(DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。
  (3)离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
  (4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSO最后浓度为5-10%),使细胞浓度为1-5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1-2ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
  2101程序降温仪广泛用于冻存细胞、胚胎等。采用微机控制技术,专用软件,能较准确地控制液氮的施放量,从而保证被冻存的生物制品以适宜的冷冻速率降温冷冻。操作简便、人机界面清楚。
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